Descripción de la práctica

1. Preparación de la batería de disoluciones (Esquema 1).

Puede cambiar fácilmente el formato del texto seleccionado en el documento eligiendo una apariencia para el texto seleccionado desde la galería de Estilos rápidos de la ficha Escribir. En la ficha Insertar, las galerías incluyen elementos diseñados para coordinar con la apariencia general del documento.  Puede utilizar estas galerías para insertar tablas, encabezados, pies de página, listas, portadas y otros bloques de creación del documento. La mayoría de los controles ofrecen la posibilidad de utilizar la apariencia del tema actual o un formato que especifique directamente. Los alimentos contienen generalmente un número elevado de microorganismos, de manera que si realizáramos siembras en medios de cultivo de una porción representativa de alimento (1 g o 1 mL), el número de colonias que aparecería en la placa sería demasiado elevado como para ser contado. Por este motivo generalmente es necesario realizar diluciones de la muestra antes de proceder a su siembra en placa.

Pesar 10 gramos del alimento (sólido) o pipetear 10 mL (líquido), asépticamente, y realizar diluciones decimales seriadas del mismo:

• Si el alimento es sólido, se introduce en una bolsa estéril, se añaden asépticamente 90 mL de agua de peptona y se homogeneíza en el “homogeneizador de paletas”.

• Si el alimento es líquido, se añade asépticamente al frasco que contiene los 90 mL de agua de peptona y se mezcla homogéneamente.

Esto constituye la dilución madre o -1.

• Tomar una pipeta estéril, pipetear asépticamente 1 mL de la dilución -1 y añadirlo a un tubo de 9 mL de agua de peptona. Esto constituye la dilución -2.

• Tomar una pipeta estéril, pipetear asépticamente 1 mL de la dilución -2 y añadirlo a un tubo de 9 mL de agua de peptona. Esto constituye la dilución -3.

2. Preparación de la batería de diluciones, recuento de microorganismos (Esquema 2).

El objetivo es determinar el número de microorganismos aerobios (necesitan oxígeno) mesófilos (su temperatura óptima de crecimiento está en torno a 30-37ºC) viables presentes en el alimento. Esta es una indicación de la carga microbiana total del alimento y, por tanto, de su calidad microbiológica.

Se realizará por siembra en placa.

• Preparar 2 placas de Petri vacías por cada dilución y marcarlas con la dilución correspondiente e identificación de la muestra

• Pipetear 1 mL de cada una de las diluciones, por duplicado (empleando una pipeta por dilución) y depositar cada mL en el fondo de las placas de Petri.

• Añadir 15-20 mL de agar PCA (fundido previamente y atemperado a 50ºC)

• Mezclar inmediatamente las diluciones con el agar haciendo un movimiento de rotación de las placas, diez veces en el sentido de las agujas del reloj y diez veces en sentido inverso, seguido de un movimiento de vaivén realizado diez veces de izquierda a derecha y diez veces de arriba hacia abajo.

• Dejar solidificar el agar.

• Incubar las placas en la estufa en posición invertida a 31±1ºC durante 48/72 h.

• Contar las colonias de las placas que tienen entre 30 y 300 colonias

• Expresar el resultado en UFC (Unidades Formadoras de Colonias) / mL o g de alimento, haciendo la media de los recuentos de las dos placas correspondientes a la misma dilución y multiplicando por el factor dilución.

• Por ejemplo, si se cuentan 56 y 60 UFCs en las placas correspondientes a la dilución -2, el resultado se expresará como ((56 + 60)/2) x 102  = 5,8 x 103 UFC/g.

3. Materiales necesarios.

• Alimentos (salchichas; ensalada; queso…).

• Cucharillas y cuchillos.

• Balanza.

• Stomacher.

• Bolsas de homogeneización estériles.

• Placas de Petri.

• Gradillas con tubos de agua de peptona.

• Cartulinas negras.

• Marcadores indelebles. 

• Pipetas de vidrio estériles o pipetas automáticas con puntas estériles.

4. Ficha del alumnado (resultados).

Indica el alimento estudiado:

Microorganismos aerobios mesófilos:
Indica los recuentos obtenidos en cada placa, la dilución empleada y el resultado obtenido por mL o gramo de alimento, en la siguiente tabla:

5. Interpretación de los resultados (estima, a partir de los resultados obtenidos, la calidad higiénica y sanitaria del alimento analizado).